猪伪狂犬病 (Pseudorabies, PR) 是由伪狂犬病毒引起的一种高度接触性、急性传染病，易感动物有牛、羊、犬、猫、兔、鼠类等。伪狂犬病毒（Pseudorabies virus, PRV）属于疱疹病毒科甲疱疹病毒亚科，双链线状DNA病毒。猪是伪狂犬病毒的自然宿主，根据感染毒株的毒力不同、病毒感染量、猪的年龄及猪群免疫力，表现不同的临床症状。我国自90年代开始基因缺失活疫苗的使用让很多猪场净化了该病，但2011年左右，伪狂犬病在全国养猪密集地区再度流行，给猪场带来较大的经济损失。
1 发病场发病过程
笔者处理的一个临床病例，该场存栏母猪800头，过去两年没有大的疫情发生。发病初期首先观察到育肥猪群体发烧，咳喘比例很高，有的猪因呼吸困难呈犬坐式，初步诊断猪流感，但添加退烧药，氟苯尼考，替米考星等呼吸道药物，没有明显改观，一周内中大猪因呼吸道问题陆续死亡100多头。随后两个月发现妊娠母猪流产，母猪产死胎、弱仔猪多。产房仔猪开始会表现神经症状，震颤，倒地四肢滑水状。猪场通过动物实验，实验室检测，确诊为伪狂犬野毒感染。
该场在诊疗的过程中，由于误诊耽误时间，造成育肥猪群死亡率较高，母猪群也出现较多的流产，死胎，故将临床常用的诊断方法进行比较，望临床工作者采用最方便快捷，最准确的诊断方法，帮助猪场及时处理问题。
2 常用诊断方法比较
伪狂犬问题往往因为见不到典型症状造成误诊。在猪场没有检测技术的时候，可以考虑接种家兔等敏感动物，因为伪狂犬病毒对这些动物是致死的。最终的确诊还要尽快送到实验室，进行血清学检测，病原分子鉴定，必要的时候还可以分离伪狂犬病毒。
2.1 临床症状与剖检病变
猪是伪狂犬病毒的自然宿主，伪狂犬的临床表现主要取决于毒株和感染量，猪的感染日龄及免疫保护水平。新生仔猪感度易感，若是缺乏母源抗体的保护，会出现典型的临床症状，表现为腹泻，口吐白沫，出现呆立不动，四肢倒地滑水等神经症状，有母源抗体保护的仔猪较少表现典型症状。剖检病变常见扁桃体坏死，肝脾有黄白色坏死点。猪场最常见育肥猪开始发病，育肥猪的伪狂犬症状类似猪流感，鼻涕，咳嗽，呼吸困难，症状一般持续6-10天，临床上多继发细菌感染，如喘气病的并发加重了猪的呼吸困难，胸膜肺炎细菌、巴氏杆菌等条件性致病菌的感染使病猪的病程缩短，常造成急性死亡。怀孕母猪在疫苗保护不力的情况下，会发生繁殖障碍，表现为怀孕前期感染，胚胎被吸收，造成母猪返情；中期感染，胚胎不完全吸收，造成胎儿的木乃伊化；后期感染，死胎、白胎，临近分娩期感染，母猪会产出弱仔。
2.2 动物实验
近年来报道的猪场伪狂犬病毒的再流行，也伴随着一个现象。猪场的看门狗，因为吃了发病猪场的死胎或胎衣等，造成以流涎、狂躁兴奋为主的神经症状，通常会造成狗的急性死亡。这种现象的出现也提示我们猪场伪狂犬病毒的感染。
对于伪狂犬病毒最易感的是猫，狗，绵羊，家兔等动物。因此对于基层兽医，诊断伪狂犬野毒感染，可以考虑兔体攻毒试验。但家兔一定选择健康家兔，必须设置对照组。病料的选择以神经症状仔猪的脑研磨液最好，含病毒量最高。通常家兔感染后24-48小时内，会出现接种部位的瘙痒，家兔会撕咬接种部位，最终会发病死亡。这种兔体攻毒试验在猪场应用最实际，但只是一种初步诊断，确诊还需要送到实验室作进一步检测。
2.3 血清学诊断
血清学诊断方法对控制和根除伪狂犬病毒的作用很重要。目前猪场普遍使用缺失gE基因的标记疫苗。gE基因缺失会导致猪伪狂犬病毒疫苗不表达gE蛋白，相应的猪也不会产生针对gE蛋白的抗体。因此可以通过gE-ELISA来检测猪血清中是否有针对gE蛋白的抗体，即说明猪感染了伪狂犬野毒。猪接触病毒后，经过2-5天的潜伏期，开始排毒，出现血清转阳。生长猪的检测需要检测14周之后的育肥猪群，因为母源抗体有可能持续到14周龄，如果检测过早，可能将母猪抗体误认为仔猪的野毒感染，造成假阳性的结果。
2.4 病毒分子鉴定
图片引自 Michael D. Sussman, Veterinary Microbiology 62 (1998) 81-96
PRV的基因组是双股线性DNA，gE基因位于PRV基因组的US区，长约1731bp，75%的G-C含量。猪场常用的伪狂犬疫苗毒有BarthaK61与PRV-Vac Plus（如上图），这两个毒株都是gE基因缺失疫苗。检测发病动物组织或血清中gE基因片段可以确诊是否有伪狂犬野毒感染。猪场送检病料，最好选择神经症状的脑组织，扁桃体，淋巴结等病毒含量高的组织。
聚合酶链式反应（PCR）技术有快速的优点，2-3小时内就可做出诊断。对试验室的要求不高，灵敏性及准确性较高，适用于基层试验室疾病的确诊。但对于伪狂犬的PCR检测，需要注意该病毒gE基因较高的G-C含量，对于PCR扩增，要求更好的DNA聚合酶。因此在实验室检测中必须设立阳性对照，只有阴阳性对照成立，才可以判断准确。这在不少的基层实验室都被忽略，出现很多的假阴性问题。
2.5 病毒分离
猪伪狂犬病毒的分离被认为是“黄金标准”。Marc145、Vero、PK-15、原代鸡胚成纤维细胞等实验室常用细胞系均可用于PRV分离。病料应无菌采取病死猪或发热病猪的脑组织(中脑和脑桥含毒量最高)、淋巴结及扁桃体，这些组织中的病毒含量最高。一般情况下，新鲜病料2～3d即可分离到病毒。从敏感性、特异性上考虑病毒的分离鉴定是黄金标准，但该方法对试验室技术要求高，诊断时间长，不适用于基层使用。
3 猪伪狂犬病的防控
本场确诊伪狂犬感染后，通过一系列措施控制了疫情，并通过一年的时间做到育肥猪阴性。其中包括严格执行生物安全措施，有效地疫苗控制方案，猪场坚持执行伪狂犬净化方案。
3.1 严格的生物安全措施
自繁自养，不外购精液。做好猪场灭鼠工作，因为老鼠是伪狂犬病毒很重要的传播媒介；对进出猪场的车辆，尤其运猪车做严格的消毒，根据研究在粪尿中伪狂犬病毒在夏季可以存活3周，冬季8-15周。敏感的消毒剂可以选择碘酸，2%氢氧化钠，5%苯酚等；对死亡仔猪的处理也很重要，可以焚烧，挖深坑掩埋，化尸池分解，禁止野外丢弃。
3.2 有效的疫苗控制方案
疫苗的免疫可以大大降低阳性猪的排毒量，阻止哺乳仔猪的潜伏感染，减轻临床症状。当前大多数猪场母猪都是采用普免的方式，每年普免4次。猪场还要选择好的伪狂犬疫苗，不同的疫苗保护效果不确实，根据国内某检测机构的权威数据，有的疫苗母猪免疫后6个月中和抗体滴度最高只有1:32；而有的疫苗中和抗体滴度可以达到1:256，所以选择中和抗体高的疫苗免疫很重要。
3.3 猪场要坚持伪狂犬净化方案
在当前大多数猪场母猪阳性率接近100%，在不影响生产的情况下，只能通过调整免疫程序，加强免疫，降低育肥猪及后备猪的阳性率，不断更新阴性后备猪来逐步降低母猪群阳性率。通过大量的猪场检测发现育肥猪在14周龄左右野毒阳性率最低，然后又再次感染，直至育肥后期阳性率100%。所以对于猪场伪狂犬的防控一定重视育肥猪后期的免疫。在发生过感染的猪场，一定在14周龄左右加强免疫一次，才可以彻底阻止伪狂犬的再次感染，保证育肥后期伪狂犬阴性状态。
总之，在伪狂犬发病疫区，一定提高警惕，采取快速准确的诊断方法。同时对于已发病场，必须坚持伪狂犬病净化。做好生物安全措施，同时使用中和抗体高的疫苗做好高频率的免疫工作，首先可以控制好育肥猪的感染，最终通过阴性后备猪的更新，逐步降低母猪群的阳性率。
参考文献 [1] 蔡宝祥主编. 家畜传染病. 北京：中国农业出版社,2001,207-209 |
